山苍子的功效药用

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《山苍子油的体外清除自由基作用》
山苍子的功效药用 第一篇

山苍子油的体外清除自由基作用

程超(湖北民族学院生物科学与技术学院，湖北恩施 445000)程超，讲师,研究生，

主要从事于食品化学与资源开发工作

摘要：本文以新鲜的山苍子为原料，通过超声波辅助水蒸气蒸馏法进行山苍子油的提取，并通过 Fenton 体系和邻苯三酚自氧化法研究了山苍子油在体外对自由基的清除作用。实验结果表明，超声波法可以提高山苍子油的得率，山苍子粗油可以有效清除羟自由基、超氧自由基。

关键词：山苍子油；抗氧化；自由基

中图分类号：TS201.4；文献标识码：A；文章篇号:1007-2764(2005)01-0061-018

The Elimination of Free Radical in Vitro of Litsea Cubeba Oil

Cheng Chao(The Bioscience and Technology College in Hubei Institute for Nationalities, Enshi 445000,China)

Abstract：In this article，using fresh Litsea Cubeba as raw material, the oil of its was extracted by water stream evaporation and ultrasonic wave. At the same time, the elimination effect in vitro of Litsea Cubeba oil was studied. The results showed that the extracting rate of Litsea Cubeba oil was enhanced by ultrasonic，and Litsea Cubeba Oil has a great effect on the elimination of free radical.

Keywords：Litsea Cubeba Oil; Antioxidation; Free radical

山苍子油为淡黄色到棕黄色油状液体，柠檬醛是其主要成分占 60%~80%，最高可达 90%，是合成香料及制药工业重要的中间体[1,2]。除此之外，还含有甲基庚烯酮，香茅醛，蒎烯、茨烯、拧烯及松油醇等，是合成紫罗兰酮系列高级香料的主要原料，也是食品工业良好的天然增香剂。【山苍子的功效药用】

研究表明山苍子油具有较强的抗氧化活性，本文利用 Fenton 反应法产生羟自由基，其容易与甲基紫上的共轭双键结合，从而使其褪色。通过加入山苍子油与甲基紫竞争结合羟自由基，从而间接测定出山苍子油清除羟自由基的能力

[3]。此外利用邻苯三酚自氧化法产生超氧阴离子自由基 O2-，其自氧化产物在 420nm 呈现最大吸收峰，在反应体系中加入能清除自由基的物质，使其吸光度低于对照组，反应一段时间后，加入抗坏血酸可终止反应，使吸光度值稳定，便于测定[4]。

1 材料、试剂与仪器

1.1 实验材料

山苍子：购于湖北省恩施市。

1.2 试剂

1mol/L FeSO4溶液：称取 5.567g FeSO4?5H2O 固体，用双蒸水定容至 20ml；1mmol/L 甲基紫溶液;：称取 0.0078g 甲基紫粉末定容至 20ml；30%H2O2溶液；市售30%H2O2用高锰酸钾法标定，浓度为 7.64mol/L。取 1ml H2O2稀释至153ml，从中取1ml 加双蒸水定容至 20ml，即为 2.5mmol/L H2O2溶液；0.2mol/L KF 溶液：称取 0.0376g KF 固体加双蒸水至 2ml；Tris-HCL 配制：称取 1.21g 三羟甲基氨基甲烷，加双蒸水定容至50ml；从中取25ml 与10.95ml0.2mol/L HCL 混合，加双蒸水至 100 ml 即为 0.05mol/LTris-HCL缓冲溶液[5]；45mmol/L 邻苯三酚溶液，用 0.05mol/LTris-HCL溶解(pH=8.2)；5%抗坏血酸溶液；蔗糖脂肪酸酯：HLB 值 13。

1.3 仪器

UV755B 紫外可见分光光度计：上海精密科学仪器有限公司；水蒸汽蒸馏装置：JY92-Ⅱ型超声波细胞粉碎机，宁波新芝科器研究所。

2 实验方法

2.1 水蒸汽蒸馏法提取山苍子粗油工艺流程

鲜果→样品瓶→一次蒸馏提取→二次蒸馏提取→分离→装瓶、密封、冷藏 鲜果→研碎→超声波粉碎→一次蒸馏提取→二次蒸馏提取→分离→装瓶、密封、冷藏

2.2 实验操作

在用水蒸汽蒸馏法提取山苍子油时，对原料进行粉碎。称取鲜果研碎，将碎末放入锥形瓶中，加水至刻度，锥形瓶放入装有冰块的大烧杯中，超声波粉碎，取出锥形瓶将料液倒入 500ml 磨口圆底烧瓶中，连接好水蒸汽蒸馏装置。在圆底烧瓶中加入少量沸珠，蒸馏至烧瓶中剩少许水时，加 100ml 蒸馏水进行二次蒸馏。提取的油水混合物用分液漏斗分离，将粗油装入10ml 容量瓶中，密封、冷藏。

未经超声波处理的鲜果也采用上法提取。

2.3 山苍子粗油得率计算

山苍子粗油得率(%)=(m2-m1)/m ×100%

式中：m1—100ml 容量瓶重(g)；m2—粗油与容量瓶质量(g)；m—取样鲜果质量(g)。

2.4 甲基紫溶液的制备

取 3 份 150ml 蒸馏水分别加入 1.5ml 甲基紫溶液，用 1mol/LH2SO4溶液调 pH 为 3.5 后，将其均分成 9 份装至 100ml 锥形瓶中。

2.5 羟自由基·OH 的产生

取二份甲基紫溶液，一份边搅拌边加入 1mlH2O2和 0.2mlFeSO4溶液，反应 10min 后，加入 1 滴 KF 溶液以消除 Fe3+的干扰，以水为参比，于 580nm

处测吸光度值，记为 A1；另一份不加 Fenton 试剂，测吸光度值记为 A0，ΔA=A0–A1。用 ΔA 间接表示·OH 的生成量，ΔA 越大，·OH 的生成量越多。

2.6 羟自由基·OH 清除率的测定

取0.1ml 粗油加入到10ml含0.1%蔗糖脂肪酸酯的乳化液中。取 5 份甲基紫溶液，分别加不同体积粗油乳化液，于 580nm 处测吸光度值，记为 A2。

·OH 清除率=(A2- A1)/(A0-A1)Χ100%

2.7 超氧自由基清除率的测定

在一系列试管中加 5ml 0.05 mol/L 的 Tris-HCL 缓冲液，对照组分别加不同体积的粗油乳化液，混均在420nm 处测定吸光度，记为 A0，实验组Ⅰ分别加不同体积的乳化液并混匀，再加入 100μl 抗坏血酸溶液，待计时至5min 时，立即注入反应体系中，混匀以终止反应在 420nm 处测定吸光度，记为 A1。实验组Ⅱ不加乳化液，按上述方法终止反应后，再加入对应的不同体积粗提液并混匀，在 420nm 处测定吸光度，记为A2[5]。

抑制率(Y )=(A2- A1)/(A2- A0)Χ100%

3 结果与分析

3.1 山苍子粗油的提取

山苍子油是一种极易挥发的香精油，通过水蒸汽可使山苍子油从其鲜果中浸提出来。该法提取时间较长，粉碎后沸腾历害，要注意控制加热温度。 表 1 超声波处理对山苍子得率的影响

Tab1 Influence of ultrasonic wave on the extraction rate of oil

超声波处理 未处理

得率(%) 1.180 5min 1.355 10min 1.405 15min 1.407 20min 1.408

由表 1 可知超声波处理鲜果后，山苍子油得率有所提高，粉碎 10min 后，

粗油得率基本保持稳定。本实验所用山苍子鲜果较嫩，工艺复杂，提取粗油有部分损失。故得油率与有关资料提供的数据相比微偏低。

3.2 初始反应 pH 值的确定

pH 对 Fenton 体系的进行影响很大，因为过低的pH 会导致 Fe(OH)3沉淀的生成，同时对甲基紫的吸光度值的稳定性也有很大的影响，所以在此对初始 pH进行了确定。

实验研究发现，在 pH=3.5 时最利于 Fenton 反应的进行，甲基紫的颜色与 pH 关系如下：pH1.0→1.5：绿→蓝；pH2.0→3.0：蓝→紫；pH≥3.0 的酸性溶液中呈紫色，于 580nm 处有最大吸光度值，所以初始 pH确定为 pH3.5。

3.3 甲基紫浓度的确定【山苍子的功效药用】

甲基紫的浓度不同，在 580nm 处的吸光度值也不同，从而导致精确度下降，为了增加实验的准确性，在此对甲基紫的浓度进行了确定，具体见表 2。 表2 不同浓度甲基紫溶液的吸光度

Tab 2 The absorbance with different concentration of Methyl Violet

浓度(mmol/L) 0.0067

吸光度 0.399 0.01 0.585 0.0133 0.827 0.02 0.983

从表 2 可以看出，甲基紫浓度在 0.01mmol/L 时，吸光度值近 0.7，此时测定精密度较高。

3.4 山苍子油对·OH 的清除作用【山苍子的功效药用】

利用 Fenton 体系产生·OH，添加不同浓度的山苍子油测定其清除率，为了保证山苍子油能与反应体系充分融合，采用蔗糖脂肪酸酯做乳化剂配成一定浓度的山苍子油乳化液(具体配制方法见实验方法中的2.5)，结果见表 3 和图 1。

由图 1 可看出，山苍子油乳化液用量与清除·OH自由基的能力存在一定的

《山苍子栽培繁殖技术简介》
山苍子的功效药用 第二篇

山苍子栽培繁殖技术简介

2006-11-19

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山苍子，又名山鸡椒、木姜子，为樟科木姜子属的珍贵芳香油料小乔木。木姜子属全世界共有200种，主要分布于亚洲的热带、亚热带地区。我国有72种，18变种，3亚型。主要分布于长江流域，其中以福建、湖南、湖北、四川等省分布最多。山苍子是目前最具有开发价值的一个种。

山苍子果实蒸馏得到的挥发性芳香油称山苍子油。山苍子精油主要用于提取柠檬醛，含量达70%，是制造紫罗兰酮、甲基紫罗兰酮、乙位紫罗兰酮及甲种维生素的主要原料，用于配制食品香精、化妆品和皂用香精；因其可降解致癌物质黄曲霉素，对防止粮食发生霉菌污染有奇特功效。山苍子核油可作飞机用的高级润滑油，亦可用于制皂，提炼甘油、日桂酸、正癸酸、十二稀酸等重要化工原料。山苍子全株均可入药，有祛风散寒、温肾健胃、消肿止痛的功效。山苍子的花、果、根皮极香，是调味佐料。由于山苍子适应性广，耐瘠薄，截水围土性能好，可用来治理疏林地水土流失。在退耕还林、还草工程实施以来，人们迫切寻找既能够保生态平衡，又能获得近期收益的树种，山苍子是一种将生态、经济、社会效益高度统一的树种。

山苍子的生态习性

山鸡椒喜温暖湿润的环境，适宜的年平均气温为10～18℃，短期可耐－12℃低温，年降水量900～1200毫米均能生长，但以1200～1800毫米为宜。对土壤条件要求不严，在酸性黄壤、中性至微碱性紫色土、山地黄壤、山地红、黄壤，以及红壤土均能生长，而以缓坡、沟谷、丘陵、土层深厚、肥沃、排水良好的土壤生长最好。山鸡椒幼苗期需要遮荫，成年树具有喜光的特性。野生在向阳的荒坡或杂草丛中的山鸡椒结果多，果皮含油量亦较高，在郁闭度较大的常绿阔叶和落叶阔叶混交林内者含油量较低。山鸡椒海拔垂直分布在云南高原可达海拔2400米处，在四川西昌地区可达3000米，在长江流域各省—般多分布于600～1800米的丘陵和山地。萌蘖能力较强，常见伐茬更新成灌木丛。4～7月为生长盛期，11～12月生长相对停止，叶色变黄脱落，进入冬季休眠期。山鸡椒结果期较早，3～4年即发育成熟，开花结果，10～15年为结果盛期。2～3月开花，花期25～30天，7～9月(江西)果实成熟。1千克有种子3～4万粒，发芽率80%左右。 山苍子的田间管理

1、中耕、追肥 从定植至第3年幼林期间，应加强抚育管理，尤以1～2年为甚。每年应中耕、除草、追肥2～3次，一般在4、10月或3、5、10月内进行。第3年以后，每年至少中耕、除草、追肥1次。追肥以氮肥为主，四川栽培区多半施人畜粪。成林后，于每年秋季进行中耕松土，并追肥1次。

2、整形 为营建矮林，可截干移栽，或在定植后1～2年的晚秋或冬季，在0.8～1.2米高处，剪截主干顶部，促使侧枝生长，形成矮化林，便于采果。

3、调整雌雄株 当进入开花期时，应分辨雌雄植株，一般按8%～12%留授粉株，挖出多余的雄株。留授粉树时，尽可能分布均匀，在去雄株时，应及时补栽发育成熟的雌株，移栽时必须带泥团移植。

4、间种 在丘陵、缓坡的幼林内，在未封林前，每年尚可间种矮秆作物，如蚕豆、花生、小麦等。

山苍子的繁殖方法

1、种子繁殖

(1)采收种子 山鸡椒采用种子繁殖，采种宜选择健壮的结实盛期的母树，在果实大部分变黑时采种。可用塑料布铺地收集。种子首先堆积4～5天，待果皮腐烂后，将果实去皮清洗，或将果实盛入竹箩内，先置入水中，除去浮在水面的杂质与瘪籽等，然后反复揉搓，使果皮与种子分离，用水淘洗，消除果皮即得种子。

(2)播种 清洗后选择好的种子，阴干后即可播种。若遇秋旱需要短期贮存，可采用湿沙贮藏。种子发芽率，随贮藏期的延长而下降。若延至第2年播种，发芽率明显下降，发芽也不整齐。因此，应在8月下旬至9月底播种。播种育苗应选择排灌条件良好的沙壤土，深翻，耙碎，平整，作高畦，畦宽1米，畦高20厘米，开横沟，施基肥，沟距30～40厘米，深5～6厘米。将沙藏的种子均匀播在沟内，每亩播种量20～25千克，覆土2～3厘米，并盖草，大部分苗出土时及时

揭去。幼苗出土半月，施清淡人畜粪水1次，先稀后浓，共追肥2～3次，及时灌水、浅中耕、除草、间苗。培育1～2年后，苗高60～70厘米，即可出圃定植。

2、扦插繁殖 可用1年生的枝条进行扦插繁殖。

3、组织培养快速繁殖

由于山苍子多野生，人工栽培极少，传统栽培主要是种子繁殖，而种子发芽率低，且极易丧失发芽力，因此常导致育苗失败。通过离体组织培养可以快速获得整齐一致的苗木用于生产。以成年植株带芽茎段为外植体，接种于MS+BA210mg/L+IBA015mg/L的诱导分化培养基中，10天时侧芽萌动，15天后侧芽打开，同时外植体切口处有白色愈伤组织，并逐渐转绿长出丛生芽。通过试验，得到最佳启动培养基为MS+BA210mg/L+IBA015mg/L，增殖系数为3132；最佳增殖培养基为MS+BA215mg/L+IBA011mg/L，其增殖系数可高达717；最佳生根培养基为1/2MS+IBA115mg/L，其生根率高达8617%，生根整齐，根质量较好。

选地整地

选林地应选择阳坡、海拔较高、土层厚、排水良好、结构疏松的黄红壤或山地棕壤土、pH4．5～6的地方。低丘缓坡可用拖拉机全垦整地或带状整地，深翻土地30～40厘米，坡度较大的山地，可采取等高线横坡整地，深翻地25～30厘米。

营造经济林

1、种子播种 可直播造林，最好随采种随播，最多不超过5天，

穴宽30厘米，深15厘米，每穴播种6～8粒，覆土2厘米。次年春天出苗，出土半月后除草、松土，7～8月再进行1次松土、除草。

2、定植 移栽时期以早春或晚秋落叶后较好。挖苗前1～2天浇透水，起苗后，应修剪断残根，带土或用泥浆浆根。可按行株距3米×2米，挖大穴，直径50厘米，深40厘米，山鸡椒雌雄异株，其利用部分为果实。为确保单位面积授粉树和结果树的适当比例，在四川东部常采用每穴栽3棵，排列成“品”字形，以便进入开花期后，适当选择雌雄株。栽苗不贸过深，在根颈3～4厘米处，覆土踏实，浇足定根水。

关键词：山苍子种植及组织培养快繁技术

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